Chester Clinic

 

Pharmaqam.uqam.ca

Centre de recherche sur la conception, les mécanismes d'action et la vectorisation de médicaments Réseau québécois de recherche sur les médicaments
P1 - ATEF, Mohammed Emehdi
Role of augmented levels of endogenous angiotensin II and endothelin-1 in enhanced expression of Gq-
PLC-beta1 proteins and vascular hypertrophy.
Atef ME, Anand-Srivastava MB, Université de Montréal, Dép. de physiologie, Pavil on Paul-G.-Desmarais,
2960, chemin de la Tour, Montréal (Qc) H3T 1J4.

Studies on the protein expression of Gqα and PLCβ1 in vascular smooth muscle cel s (VSMCs) from
spontaneously hypertensive rats (SHR) at different ages are lacking, and the implication of Gqα in the
hypertrophy of VSMCs still not clearly defined. Here we investigated if VSMCs from SHR, at different ages (12
and 16 weeks), exhibit enhanced expression of Gq/11α and PLCβ1 and if this up-regulation is related to
VSMCs hypertrophy (increased protein synthesis). Since the levels of endogenous angiotensin II (ANG-II)
and endothelin-1 (ET-1) are enhanced in VSMCs from SHR, the aim of this study was also to characterize the
signaling mechanisms whereby endogenous ANG II and ET-1 can modulate Gqα -PLCβ1 expression in
VSMCs. We report for the first time that VSMCs from 16 weeks but not from 12 weeks SHR exhibited
enhanced levels of Gqα and PLCβ1 proteins as compared to VSMCs from age matched WKY rats. The
increased level of Gqα and PL Cβ1 proteins in VSMCs form SHR was associated with enhanced protein
synthesis (cell hypertrophy). Silencing of Gqα protein by specific SiRNA and AS-ODN attenuated the
enhanced protein synthesis in VSMCs from SHR. The enhanced expression of Gqα and PLCβ1 proteins in
VSMCs from 16-wk-old SHR was inhibited by AT1 and ETA receptor antagonists, losartan and BQ123
respectively but not by ETB receptor antagonist, BQ788. In addition, losartan and BQ123 also attenuated
the enhanced protein synthesis in VSMCs from SHR compared to WKY. Furthermore, the augmented
phosphorylation of ERK1/2 and PKC delta in VSMCs from SHR was attenuated by losartan and BQ123 but
not by BQ788. These results suggest that the enhanced levels of endogenous ANGII and ET-1 in VSMCs from
SHR increase the protein expression of Gqα and PLCβ1 and subsequent VSMCs hypertrophy. Which may
implicate MAP kinase signaling and PKC delta activation.
P2 - BAGHERI, Haniyeh

Régulation différentielle de différents ligands sur la désensibilisation du récepteur opioide delta.
Haniyeh Bagheri, Graciely Pineyro, Université de Montréal, Centre de recherche du CHU Sainte-Justine,
Montréal (Qc).
Introduction : Les opiacés sont des analgésiques très efficaces pour le traitement des douleurs, mais leur
administration prolongé peut induire de la tolérance analgésique. Au niveau moléculaire, la tolérance
serait associée à la désensibilisation des récepteurs opiacés. La morphine, agoniste du récepteur Mu,
produit le plus de tolérance avec une faible capacité d'internalisation et une grande capacité de
désensibilisation. Ces observations mettent en évidence que la conformation spécifique de la morphine
détermine ces phénomènes. Nous estimons que les conformations distinctes stabilisées par les ligands
opioïdes semblent être responsables des différents profils de désensibilisation et d'internalisation.
Résultats : En ce qui concerne la désensibilisation du RDO, nous avons observé que la réponse aux
agonistes tels que le mcpTIPP, la morphine et le SB 235863 désensibilisent plus lentement que cel le du
DPDPE qui est similaire au snc-80. D'autres agonistes tels que la deltorphine et la met-enképhaline qui ne se
différencient pas entres eux, ont une plus grande capacité de désensibilisation que le DPDPE et le snc-80.
Quant à leur capacité d'internalisation, le mcpTIPP et le SB 235863 n'induisent aucune internalisation du
RDO. Alors, que la deltorphine engendre 80 % d'internalisation du RDO. Les agoniste DPDPE, le snc-80 et la
met-enkephaline induisent ± 60 % d'internalisation du RDO. Finalement, les ligands opiacés tels que la
deltorphine, la met-enképhaline, le snc-80 et le DPDPE sont le plus efficace à inhiber l'AMPc,
contrairement au mcpTIPP et au SB 235863.
Conclusion : Ces résultats nous indiquent qu'ils n'existent aucune corrélation entre l'internalisation et la
désensibilisation du RDO. Ce manque de corrélation est caractéristique de la stabilisation de différentes
conformations du récepteur activé par des ligands distincts.

P3 - BÉDARD, François
Synthèse, études relation structure-activité et activité antimicrobienne d'analogues des tigérinines.
François Bédard, Xinxia Liang, Élénie Godzaridis, Irena Kukavica-Ibrullj, Roger Lévesques, Eric Biron,
Université Laval, Centre de recherche du CHUQ (CHUL), 2705, boul, Laurier, Québec (Qc).

L'augmentation et la propagation alarmante de la résistance aux antibiotiques chez plusieurs souches de
bactéries pathogènes stimulent le développement de nouveaux agents antimicrobiens avec des modes
d'action innovateurs. Dans la nature, un grand nombre d'espèces animales incluant les amphibiens,
insectes et mammifères utilisent des peptides antimicrobiens pour se protéger contre des microorganismes
pathogènes. La grenouil e originaire de l'Inde, Rana tigerina, sécrète des peptides antimicrobiens de 11 à
12 acides aminés comportant une boucle caractéristique de neuf acides aminés fermée par un pont
disulfure appelés Tigérinines. Caractérisé par une boucle de neuf acides aminés comprenant deux prolines
et fermée par un pont disulfure, les tigérinines ne montrent pas de ressemblance à aucun des peptides
antimicrobiens connus. Possédant une structure non-hélicoïdale unique comparativement aux autres pe
ptides antimicrobiens issus d'amphibiens, le mécanisme d'action des tigérinines n'est pas encore connu.
Un criblage par «phage display» pour l'identification d'inhibiteurs de l'enzyme MurD, une ligase permettant
la biosynthèse du peptidoglycane. La grande similarité avec les tigérinines nous conduit à penser que la
MurD est une cible potentiel pour ces derniers. Les analyses in silico utilisant un modelage et de la
dynamique moléculaire en liant la MurD de P. aeruginosa avec la MurDp1, tigérinine-1 ou la tigérinine-2
montrent des interactions similaires de sites de liaisons. Ces résultats suggèrent que la MurD est une cible
intracellulaire pour la Tigérinine-1 et la Tigérinine-2. La synthèse, les essais enzymatiques d'inhibition de la
MurD, l'évaluation de l'activité antibactérienne et la relation structure-activité de la MurDp1 et des
analogues des tigérinines seront présentés.

P4 - BERGERON, Jodrey
Synthèse chimique d'un produit naturel de la famille des indolizidines (monomorine) à l'aide de la chimie
du cuivre.
Jodrey Bergeron, Benoit Daoust, Université du Québec à Trois-Rivières, Pavillon Pierre-Boucher.
Les amphibiens et les insectes sont des organismes qui produisent de nombreux composés biologiquement
actifs sous forme de phéromones, de venins et de toxines. Parmi ces composés, on retrouve la classe des
alcaloïdes indolizidinique. Le but de notre projet est de mettre au point une nouvel e synthèse d'un produit
naturel de cette famille à l'aide d'une méthode mise au point dans le laboratoire du professeur Daoust. Le
squelette indolizidine est formé d'un cycle à six membres et d'un cycle à cinq membres ayant un atome
d'azote à la jonction des deux cycles. Il est le précurseur de nombreux produits naturels que l'on retrouve
chez plusieurs organismes et qui peuvent avoir une activité biologique importante. D'ail eurs, ces produits
naturels sont intéressants à cause de leur provenance exotique et de leurs propriétés pharmacologiques.
Par contre, ils ne sont isolables qu'en petite quantité. Leur synth èse pourrait permettre de mieux étudier
l'activité de ces molécules. Dans ce projet, nous tenterons de synthétiser la monomorine, phéromone de la
fourmi pharaon connue pour ses propriétés de reconnaissance spatiale. Pour ce faire, nous al ons utiliser
une séquence de réactions utilisant le cuivre mise au point dans le laboratoire du professeur Daoust. Cette
séquence se divise en trois étapes. Tout d'abord, un couplage au cuivre impliquant un réactif azoté est
effectué. Un second couplage au cuivre impliquant un réactif oxygéné et un réarrangement de Claisen
complètent cette séquence. Les avantages de cette séquence sont de permettre, en peu d'étapes et à
l'aide de réactifs peu dispendieux et non toxiques, de préparer des composés à haute valeur ajoutée.
Pour réaliser notre projet, nous devrons donc effectuer trois grandes phases. Tout d'abord, nous allons
synthétiser une molécule nous permettant d'utiliser la séquence réactionnelle impliquant le cuivre. Ensuite,
nous allons appliquer la séquence de trois étapes mise au point dans le laboratoire du professeur Daoust.
Cette séquence nous amène très près de la synthèse finale. Quelques étapes pour modifier le produit vont
nous amener à l'obtention de la monomorine. Les objectifs clés de cette synthèse seront dans un premier
temps de fabriquer la monomorine en un mélange racémique et ensuite de pousser plus loin la synthèse
en tentant la fabrication de manière énantiopure.


P5 - BERNIER, Cynthia
Synthetic lethal siRNA and shRNA screens identify novel drug combination strategies for dexamethasone in
multiple myeloma.
Cynthia Bernier, Franziska Ertel, Maryanne Bel omo, Alexandre Bramoullé, Francis Robert, Gordon Shore and
Anne Roulston, Laboratory for Therapeutic Development, Goodman Cancer Research Centre, McGil
University, McIntyre Medical Sciences Bldg., Montreal (Qc).

Multiple myeloma (MM) is an incurable malignancy of plasma B lymphoid cells that occurs in the bone
marrow. Treatment usually involves autologous stem cel transplantation followed by various combinations
of chemotherapies all of which include dexamethasone in first-line as well as end-stage therapies.
Dexamethasone is a steroid hormone analog that binds to the glucocorticoid nuclear receptor and acts
by differential y regulating the expression of genes involved in inflammation, and cell death. We have
conducted RNAi screens in the presence of dexamethasone to identify genes whose knock-down confers
altered sensitivity to this agent. Using si and shRNA technologies, we have identified two potential y new
dexamethasone-based drug combination strategies. One strategy was derived from the identification of
Mcl-1 as a synthetic lethal gene with dexamethasone in an shRNA screen in the JJN-3 MM cell line. Mcl-1 is
an anti-apoptotic Bcl-2 family member, is often over-expressed in multiple cancers, and has been linked
with resistance to chemotherapy. The combination of dexamethasone with the Mcl-1 inhibitor obatoclax
results in a synergistic inhibition of MM cell line growth. The synergy is most pronounced when cells are pre-
treated with dexamethasone suggesting the involvement of gene regulation in the combination therapy.
Bim, a pro-apoptotic Mcl-1 binding partner, is induced in multiple myeloma cells in vitro and in vivo and its
induction is required for dexamethasone mediated cell killing. The obatoclax/dexamethasone
combination is currently being evaluated in an immunocompetent murine model of multiple myeloma. A
second strategy identified in the siRNA screen in KMS-11 MM cells involves inhibition of aurora kinase B.
Drug combination experiments with an aurora B specific inhibitor AZD1152 indicate a synergistic cel kil ing
effect if cel s are pre-treated with AZD1152 followed by dexamethasone treatment. The mechanism by
which AZD1152 and dexamethasone synergize is currently under investigation. These results il ustrate the
power of synthetic lethality screens in identifying potential combination strategies for use with
dexamethasone-based regimens in multiple myeloma.

P6 - BOUCHER, Benjamin

Towards an accurate mapping of process-specific genetic interactomes in Caenorhabditis elegans.
Benjamin Boucher, Anna Y. Lee, Michael Hallett, Sarah Jenna, Pharmaqam, UQAM, Montréal (Qc).
Recent developments in computational methods have brought new insights into how genes influence
each other in biological networks. So far, several in silico approaches using weighted data integration have
been successfully employed to predict genetic interactions (GIs) in Caenorhabditis elegans. These
methods use validated sets of GIs as training sets, considering GIs as a homogenous set of entities.
However, studies of GIs networks in model organisms suggest some modular and structural organization
within GI networks that could differentiate GI classes beyond the simple classes of positive and negative
interactions. The biological signatures of these distinct classes of GIs have not been clearly identified yet.
We present a large-scale analysis of GI properties revealing new topological and functional properties of
several homogeneous populations, i.e. classes, of GIs. We showed that GI clustering into these classes
could not be explain by missing data alone, but a combination of GI properties associated with the
connectivity characteristics of interacting gene products in the protein-protein interaction network and
their biological functions. We showed that generating a separate predictor for each class of GIs, highly
improved the performance of genetic interaction predictor. Altogether, our results suggest that predictors
specific to given signaling pathways and biological processes wil perform significantly better than generic
predictors of GIs in a given organism.
P7 - BOUKHEDIMI, Yasmin
Targeted Metabolomic Profiling of a Novel C. elegans ALS Model using Stable Isotope Labeling and High
Resolution Accurate Mass Spectrometry.
Yasmin Boukhedimi, Sarah Jenna, J. Alex Parker, Lekha Sleno*, UQAM, Département de chimie, 2101, rue
Jeanne-Mance, Montréal (Qc).

We have investigated the mechanism involved in the neurotoxicity of TDP-43, a TAR DNA-binding protein, in
a C. elegans model using a semi-targeted metabolomics strategy. The mislocalisation of this nuclear
protein causes neuronal dysfunctions associated with early stages of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). This
phenotype is also associated with other neurodegenerative diseases such as Alzheimer's and Parkinson's.
Cytoplasmic aggregates of TDP-43 are an essential element of the human pathogenesis of ALS and this
GFP-free mutant represents an important model which includes the formation of insoluble misfolded TDP43
aggregates. Differential labeling strategies for the relative quantitation between the mutant model and its
control were used for relative quantitation purposes in combination with high resolution LC-MS/MS analysis.
This novel approach allowed, in a single injection, both qualitative and quantitative data to be colle cted
and processed for semi-targeted metabolite profiling and relative quantification.
P8 - CHAN, Manuel

The identification of novel drug combination strategies for teglarinad in non-small cell lung cancer.
Manuel Chan, Michel Gravel, Alexandre Bramoul é, Jonathan Cole, Gordon Shore and Anne Roulston,
McGil University, Laboratory for Therapeutic Development, Goodman Cancer Research Centre, McIntyre
Medical Sciences Bldg., Montreal (Qc).

Teglarinad is one of a promising new class of anti-cancer agents that targets the enzyme, nicotinamide
phosphoribosyltransferase (NAMPT) and interferes with nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)
biosynthesis. NAD+ is a key enzymatic co-factor involved in cel ular respiration, redox reactions, DNA repair,
transcription and is required to sustain rapid cancer cell growth and survival. Treatment with teglarinad
results in a rapid intracel ular decline of NAD+ within 6 hrs followed by a decline in ATP and cell growth 24
hrs later. We are conducting synthetic lethal screens involving si and shRNA technologies in non-small cel
lung cancer (NSCLC) cel models to identify clinically relevant drug combinations and/or biomarkers that
could help accelerate the clinical development and expand the utility of this compound. To conduct
shRNA screens, a custom-designed library that consists of 4-6 shRNA-targeting lentiviruses for each of 1100
genes involved in cellular metabolism, translation, phosphorylation and cell death was constructed. Pooled
screens to identify genes involved in increased sensitivity or increased resistance to teglarinad are currently
under way in an H1299 cel model. A genome-wide siRNA screen in A549 cel s identified dihydrofolate
reductase (DHFR), whose mRNA knockdown confers a 2-5 fold increase in sensitivity to teglarinad.
Pemetrexed is a small molecule DHFR and thymidylate synthase (TS) inhibitor currently used as a front-line
therapy in non-squamous NSCLC. The combination of pemetrexed and teglarinad results in a
synergistical y lethal effect in both A549 and H1299 cells. The synergy is more pronounced when cel s are
treated sequential y: pemetrexed fol owed by teglarinad. This novel combination of teglarinad with
pemetrexed could represent an effective combination therapy for use in NSCLC treatment.
P9 - CHARFI, Iness

Rôle de la sélectivité fonctionnelle dans la modulation du trafic du récepteur delta opiacé.
Charfi Iness, Naji Karim, Mnie Filali Ouissame, Thibault Dominic, Trudeau Louis Eric, Pineyro Graciela,
Université de Montréal, Département de pharmacologie, Centre de recherche du CHU Ste-Justine, 3175,
Cote Ste-Catherine, Montréal (Qc).

Les opiacés sont des analgésiques puissants pour le traitement des douleurs sévères. Les agonistes du
récepteur delta opiacé (DOR) induisent moins d'effets secondaires que ceux du récepteur mu, ce qui les
rend une cible d'intérêt. Cependant, ils induisent la tolérance à l'analgésie. Ces agonistes ne produisent
pas tous le même niveau de tolérance. Notre laboratoire a récemment montré que la désensibilisation est
reliée à la capacité des ligands de stabiliser différentes conformations qui sont reconnues de façon
différentielle par les protéines régulatrices (sélectivité fonctionnelle: SF). Donc il sera intéressant de
déterminer si différents ligands du DOR font intervenir, de façon distincte, la β-arrestine et/ou la PKC, deux
protéines essentiel es à la désensibilisation et tout particulièrement l'internalisation du DOR. Résultats: *Le
DPDPE et le SNC80 sont les drogues les plus efficaces dans la v oie cyclase, suivis par l'UFP512, la morphine
et le TIPP. *Seulement le DPDPE et le SNC80 internalisent dans les cel ules HEK et les neurones. Les autres
drogues n'internalisent que dans les neurones. *Ces différents agonistes internalisent dans les neurones de
façon proportionnel e à leur efficacité *l'internalisation des différents ligands dépend de la PKC dans les
neurones, mais pas dans les cellules HEK et la β-arrestine y est impliquée dans les deux systèmes. Ces
résultats nous amènent à étudier d'autres mécanismes de désensibilisation afin de déceler des indices de
SF.
P10 - CHEFSON, Amandine

Plateforme de Biopharmacie : Solutions en formulation et ADME-Tox.
Chefson, Amandine, Faculté de pharmacie, Université de Montréal, Pavillon Jean-Coutu, 2940, chemin de
Polytechnique, Montréal (Qc).
Seulement une faible proportion des composés biologiquement actifs possèdent des propriétés
biopharmaceutiques optimales pour devenir un médicament. Ces propriétés regroupent la
pharmacocinétique, le profil ADME (administration, élimination, métabolisme, excrétion), et la toxicité d'un
composé. La plateforme de biopharmacie, créée en 2009, a pour mission de caractériser et d'optimiser les
propriétés biopharmaceutiques des petites molécules ainsi que de proposer des solutions innovantes en
préformulation, formulation et ADME-Tox pour nos partenaires académiques et industriels.
P11 - CHERIF, Hosni

Le récepteur GPR55 cible pharmacologique lors du développement du système visuel.
Cherif H., Argaw A., Desgent S., Talbot A., Gagnon J. et Bouchard J-F., École d'optométrie, Université de
Montréal, Laboratoire de neuropharmacologie, 3744 Jean-Bril ant, Montréal (Qc).
Le développement des projections rétiniennes vers les noyaux visuels du thalamus est régulé par des
molécules de guidage influençant la navigation du cône de croissance. Dans cette étude, nous
démontrons que le récepteur GPR55 est exprimé au niveau du système rétinothalamique au cours du
développement. Nous avons également observé que le GPR55 régule la morphologie du cône de
croissance et la croissance axonale, via la voie de signalisation MAPK/ERK. En bref, nous avons observé in
vitro que les agonistes du récepteur GPR55 (LPI, O1602) induisent une chimio-attraction du cône de
croissance, une augmentation du nombre de filopodes ainsi que de la croissance axonale globale.
Inversement, l'antagoniste de GPR55 (cannabidiol) diminue la longueur des projections des explants
rétiniens et du nombre de filopodes et induit une chimio-répulsion du cône de croissance. Les effets de ces
agents pharmacologiques sont uniq uement médiés par le récepteur GPR55. En effet, lorsqu'utilisés chez
la souris transgénique dont le gène codant pour le récepteur GPR55 a été altéré (gpr55 / ), aucun effet
sur la morphologie du cône de croissance ainsi que sur la croissance n'a été observé. Actuellement, nous
étudions si une simple injection intraoculaire d'un agoniste ou d'antagoniste du récepteur GPR55 peut
modifier la navigation des projections rétiniennes in vivo. Ces observations soulignent l'important rôle joué
par le récepteur GPR55 au cours de la formation du système nerveux central. La découverte de
mécanismes impliqués dans le développement mènera potentiellement à l'élaboration de nouvelles
avenues thérapeutiques pouvant régénérer un système nerveux lésé.
P12 - CHU, Fong Lam

Targeted vs. untargeted metabolomics for assessing perturbations in yeast tryptophan pathway by LC-
MS/MS.
Fong Lam Chu, Julie-Anne Jauffrit, Guri GIaever, Corey Nislow, Lekha Sleno*, UQAM, Chimie, Montréal (Qc).

With the aim of improving the quantitation of endogenous metabolites in biological samples, the goal of
this study was to develop a targeted metabolomics approach for investigating perturbations of tryptophan
metabolism in yeast. This pathway is of considerable interest since it seems to be affected in several
chemical genomics experiments. An LC-MS/MS assay was developed for the quantitative analysis of
metabolites involved in tryptophan biosynthesis and degradation in yeast. Two workflows will be
compared: 1) a targeted metabolomics strategy using an MRM based assay on a QqLIT mass
spectrometer, and 2) an untargeted strategy on a high speed QqTOF platform. Two different yeast strains
were analysed to observe the effect of two drug treatments. Advantages of both workflows (targeted and
untargeted) will be discussed in terms of sensitivity, selectivity and information content for investigating
metabolic pathways in yeast.
P13 - De CARUFEL, Carole Anne

Rôles des glycosaminoglycanes dans l'amyloïdogenèse de l'islet amyloid polypeptide.
Carole Anne De Carufel, Sabrina Sahnouni, Steve Bourgault, Université du Québec à Montréal,
Département de chimie, Montréal (Qc).

Les dépôts protéiques, dont ceux sous forme de fibres amyloïdes, extraits de patients atteints de maladies
associées aux repliements erronées de protéines (Alzheimer, amyloses, Creutzfeldt-Jakob) sont toujours
associés aux glycosaminoglycanes. Notamment, les glycosaminoglycanes sembleraient jouer un rôle dans
la cinétique d'agrégation et dans la stabilité des fibres. Les glycosaminoglycanes sont de long
polysaccharides linéaires présents dans la matrice extracellulaire et à la surface externe des membranes
où ils sont généralement liés de façon covalente à un protéoglycanes. Dans le cadre de cette étude, nous
avons étudié l'effet des glycosaminoglycanes sur l'amyloïdogenèse et la cytotoxicité de l'hormone
peptidique islet amyloid polypeptide (IAPP). L'IAPP est un peptide de 37 acides aminés qui est co-sécrété
avec l'insuline par les cellules bêta-pancréatiques. L'agrégation de ce pepti de en fibres amyloïdes au
niveau des îlots de Langerhans est intrinsèquement associée à la pathogenèse du diabète de type II. Nous
avons initialement étudié l'impact de la présence de glycosaminoglycanes sulfatés sur l'agrégation de
l'IAPP à l'aide de la fluorescence de la thioflavine T et du dichroïsme circulaire. Nos résultats montrent que
l'ajout de glycosaminoglycanes accélère la formation d'agrégats affichant une structure quaternaire en
feuillet bêta-croisé et ce, principalement en réduisant la première phase de l'amyloïdogenèse (formation
du noyau). En utilisant une lignée cellulaire bêta-pancréatique, INS-1, nous avons ensuite observé que les
glycosaminoglycanes réduisent la cytotoxicité induite par l'IAPP. Ces résultats suggèrent que les
glycosaminoglycanes accélèrent l'amyloïdogenèse de l'IAPP par la conversion de structures quaternaires
non-fibrillaires cytotoxiques en fibres amyloïdes, qui eux sont que faiblement toxiques pour les cel ules bêta-
pancréatiques.
P14 - EL-BASYUNI, Yousra Ali

Antisense oligodeoxynucleotide targeting Giα2 and Giα3 proteins a novel approach attenuating the
development of Hypertension in Spontaneously hypertensive rats.
Yousra Ali El-Basyuni , Madhu B. Anand-Srivastava, Département de physiologie, Faculté de médecine,
Université de Montréal, Pavillon Paul-G.-Desmarais, Montréal (Qc).
Hypertension is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world .In our LAB special
attention was devoted to the role of Giα2 and Giα3 proteins in the development of hypertension .We have
previously shown that the levels Giα2 and Giα3 of proteins were augmented in Spontaneously hypertensive
rats (SHR) before the onset of hypertension. ACE inhibitor is associated with decreased both Gi-proteins In
addition , intrapertoneal injection of Pertusis Toxin inactivated both Giα proteins prevented Hypertension
development in SHR. However, the specific contribution of Giα2 and Giα3 proteins in hypertension
development is still not known. In the current study we used antisense oligodeoxynucleotide (AS) targeting
Giα2 and Giα3 to investigate their specific contribution in the development of hypertension. Giα-2 and Giα-3
antisense (1mg Kg body weight) encapsulated in cationic liposomes were administrated intravenously into
3 weeks-old pre-hypertensive SHR and WKY, whereas the control groups of WKY and SHR received
PBS,empty liposomes or sense. The BP was monitored weekly using tail-cuff technique. Heart and aorta
were used to study Gi proteins expression. The knockdown of Giα2 protein by Giα2-As prevented the
development of hypertension in SHR treated group up to the age of 6 weeks thereafter, the BP started to
rapidly increase and reached the same level found in control SHR groups at the age of 9 weeks. At 6week-
old, SHR Giα2-As treated ,WKY Giα2-As treated ,WKY Giα3-As treated and all WKY-CTL groups had normal BP,
while SHR-PBS ,Empty liposomes ,Gi2sense and Gi3sense had high blood pressure .On the other hand, the
BP of Giα3-As treated group started to increase at the age of 4weeks. the SHR Giα3-As had augmented
blood pressure at 6week-old but lower than that of SHR-CTL .The heart and aorta obtained from 6week-
old SHR Giα2-As and Giα3-AS had significant decrease in Giα2 and Giα3 proteins expression respectively
.WKY Giα2-As and Giα3-AS had decreased in Giα2 and Giα3 proteins expression respectively despite having
no change in the BP compared to CTL WKY .At the age of 9 week ,the SHRGiα2-As and Giα3-As had the
same BP and Gi proteins expression and as the control SHR. These results suggest that the enhanced levels
of both Giα-2 and Giα-3 proteins are implicated in the development of hypertension and that Giα-2 but not
Giα-3 plays a major role in the development of hypertension in SHR(supported by CIHR).
P15 - FRICIU, Maria Mihaela

Complexe Carboxyméthylamidon/Lécithine pour la Libération Ciblée de la Mésalamine.
Maria Mihaela Friciu, Tien Canh Le, Pompilia Ispas-Szabo, Mircea Alexandru Mateescu, UQÀM,
Département de chimie, Montréal (Qc).

La mésalamine est couramment utilisée dans le traitement des maladies inflammatoires de l'intestin (MII) et
son efficacité est étroitement reliée à une action locale, au niveau du côlon. L'absorption systémique de la
mésalamine, dans les parties pré-coloniques, entraîne non seulement une réduction importante de la dose
efficace, mais aussi un risque élevé des effets indésirables. Actuel ement, les formes commerciales (i.e.
Asacol®) administrées par voie orale sont majoritairement basées sur un système pH-dépendant.
L'inconvénient majeur de cette technologie est la grande variation interindividuel e du pH gastro-intestinal
avec un impact notable sur le profil de libération de la mésalamine. L'objectif principal de la présente
recherche a été d'élaborer un nouveau système pH-indépendant qui assure une protection de la
mésalamine durant le passage gastrique et une livraison dans le côlon. Pour y parvenir, un nouvel excipient
à base de Carboxyméthyl amidon (CMA) a été mis au point et utilisé comme excipient pour le transport
de la mésalamine dans le côlon. Le CMA a été déjà proposé comme matrice pour la libération contrôlée
de petites molécules ou des agents bioactifs mais il reste moins performant pour la livraison au côlon à
cause de sa solubilité élevée dans un milieu neutre et de sa sensibilité à l'amylolyse. Dans ce contexte,
nous avons considéré la complexation du CMA avec la lécithine (L) afin d'obtenir une matrice plus
hydrophobe qui pourrait assurer une libération retardée des substances actives. Le complexe CMA/L a été
obtenu par traitement à haute température du mélange de CMA et de L. La formation du complexe a été
élucidée à l'aide du test d'iode, des analyses d'infrarouge à transformée de Fourier (FTIR), de diffraction des
rayons X (DRX) et de la microscopie électronique de balayage (MEB). Les résultats ont montré qu'il y a une
insertion partiel e des chaines alkyle de l'acide gras à l'intérieur de l'hélice du CMA, tandis que la partie
polaire est dirigée à l'extérieur. De plus, certaines parties alkyles des L non incluses dans l'hélice (extra-
hélicales) sont stabilisés entre les deux chaines macromoléculaires de CMA via des interactions ionique et
associations hydrophobe. L'étude des profiles de dissolution a montré qu'il y a une très faible (<5 %)
libération de mésalamine pour les premiers 5 h, mais une libération rapide à partir de 6 h et complète
après 8 h dans le milieu intestinal simulé. Aucune différence significative n'a été observée entre les profiles
cinétiques de la mésalamine à des différentes valeurs de pH du milieu intestinal (6.5-7.5) suggérant que la
matrice CMA/L est un système pH-indépendant. Par ailleurs, en variant la proportion de la matrice, une
libération temps-dépendante a été observée, ce qui permet de «programmer» la livraison des
médicaments aux sites désirés. Ce type de complexe est différent des complexes de l'amidon (amylose)
avec des acides gras (monoalkyle) inclus dans la structure hélicoïdale et aussi différent des complexes
polyélectrolytes du CMA avec le chitosane. À notre connaissance, cette étude est une des premières à
mettre en évidence des relations entre l'amidon modifié et les lipides dialkyles, ce qui pourrait servir de
base à de différentes applications telles que cosmétique, nutraceutique ou alimentaire, etc.
P16 - GILBERT, Caroline

Development of New DCIR Extracellular Inhibitors Blocking HIV-1 Attachment and Propagation.
Alexandra A. Lambert, Arezki Azzi, Sheng-Xiang Lin, Geneviève Al aire, Karianne P. St-Gelais, Michel J.
Tremblay and Caroline Gilbert, Université Laval, Centre de recherche du CHUQ, 2705, boul Laurier, Québec
(Qc).

Introduction: The HIV-1 pandemic continues to expand while no effective vaccine is yet available. Finding
new therapeutic targets and drugs is therefore crucial. We have previously shown that the dendritic cell
immunoreceptor (DCIR), a C-type lectin receptor expressed in dendritic cells (DCs), acts as an attachment
factor for HIV-1 to DCs and contributes to HIV-1 transmission to CD4+ T lymphocytes (CD4TL). Directly
involved in HIV-1 infection, DCIR is expressed in apoptotic or infected CD4TL and promotes trans-infection
to bystander cells. The aim of the present study is to characterize the extracellular domain of DCIR and to
test chemical inhibitors of HIV-1 attachment thereto.
Results: We present the first three-dimensional model of DCIR structure. Based on this structure, several
inhibitors were selected to target viral interaction with the carbohydrate recognition domain and the EPS
motif. Preliminary screening using Raji-CD4-DC IR cel s identified two inhibitors that decreased HIV-1
attachment and propagation. These inhibitors did not affect the proliferation of peripheral blood
mononuclear cel s.
Conclusions: The results of this study thus suggest structures for novel molecules capable of blocking HIV-1
transmission by DCs and CD4TL.

P17 - GIRARD, Anick
Nouvelle approche par réouverture de cycles pour le séquençage post-criblage de chimiothèques
combinatoires de peptides cycliques.
Anick Girard & Éric Biron, Faculté de pharmacie, Université Laval, Centre de recherche du CHUQ, Pavillon
CHUL, Laboratoire de chimie médicinale, 2705, boulevard Laurier, Québec (Qc).

Les interactions protéine-protéine (IPP) jouent un rôle crucial dans la majorité des processus cel ulaires et
constituent un point stratégique d'intervention pour la conception de nouveaux agents thérapeutiques. En
se basant sur la nature de l'interaction, les peptides, avec leur capacité à mimer des structures
secondaires de protéines, représentent des prototypes moléculaires de choix pour le développement
d'inhibiteurs IPP. Par contre les peptides linéaires possèdent une faible biodisponibilité et sont dégradés
rapidement par les protéases. Avec une rigidité plus grande, les peptides cycliques démontrent une
meilleure stabilité protéolytique que les peptides linéaires tout en conservant leurs nombreux avantages
comme une haute sélectivité, une faible toxicité et une diversité moléculaire extraordinaire. La méthode «
one-bead two-compound » est une stratégie exploitée en chimie combinatoire pour générer des
chimiothèques de cyclopeptides. El e consiste à compartimenter topologiquement des billes pour avoir un
peptide cyclique à l'extérieur servant au criblage et un peptide linéaire à l'intérieur pour le séquençage
par spectroscopie de masse.MS/MS. Au laboratoire, nous avons développé une stratégie qui élimine
l'étape de compartimentation et d'encodage. Cette nouvelle méthode permet d'obtenir le peptide
cyclique sur bil e et d'effectuer une réouverture du macrocycle après le criblage pour générer la forme
linéaire, séquençable par MS/MS. Nous avons exploité le fait que la méthionine en présence de bromure
de cyanogène forme sélectivement des homosérines lactones pour développer une chimiothèque de
cyclopeptides contenant une méthionine et pouvant subir une réouverture sélective. Cette approche
prometteuse permettra d'identi fier des ligands pour les protéines cibles et des agents thérapeutiques
ciblant les IPP.

P18 - GOLIZEH, Makan

Assessing covalent modification of UPRM8 to the transmembrane protein-kinase Ire1 using high resolution
tandem mass spectrometry.
Makan Golizeh1, Daniel Dirck Wal er2, David Thomas2, Lekha Sleno1, Université du Québec à Montréal,
Dép. de chimie; 2 McGill University, Dept. of Biochemistry, Chimie et Biochimie UQÀM, 2101, Jeanne-
Mance, Montréal (Qc).

An unfolded protein response modulator, UPRM8, identified in a smal molecule screen in Saccharomyces
cerevisiae, showed to inhibit the ribonuclease activity of Ire1, a type-I ER transmembrane kinase involved in
ER stress response. The binding mechanism was hypothesized to involve a sulfhydryl covalent modification
on one of the free cysteine residues, diminishing the protein's activity. In order to have direct evidence of
the proposed mechanism, UPRM8 and IRE1 were co-incubated and then digested using trypsin in the
presence and absence of reducing and alkylating agent to probe the reversibility of the modification.
Control experiments were performed on the non-active reduced version of UPRM-8 and also the Ire1
protein alone. Samples were analyzed by ultra-pressure liquid chromatography coupled to high resolution
tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS), on a hybrid quadrupole-time of flight (QqTOF) instrument. Based
on comparative a nalysis between samples and using de novo peptide sequencing, a unique bromine-
containing adduct was characterized on cysteine C-832 adjacent to the highly conserved ‘DFG' motif in
the kinase domain of Ire1, a key site for Mg2+/ADP coordination and thus enzyme activity. The identified C-
832 modification which is both irreversible and unique to Ire1-UPRM8 treatment proves covalent binding is
involved in the activity of the UPRM8 molecule leading to the loss of its biological activity.
P19 - GUITÉ-VINET, François

Chemokine receptor CXCR3 responses to its three chemokine ligands and CXCR3 heteromerization with
CXCR7.
François Guité-Vinet, Stéphanie Gravel, Nicolas Montpas, Nikolaus Heveker, Université de Montréal, Centre
de recherche, Hôpital Sainte-Justine, 3175, ch. de la Côte Sainte-Catherine, Montréal (Qc), and Dept. of
Biochemistry, Université de Montréal.

Chemokines are chemoattractant proteins responsible for immune cell migration via their interaction with
G protein coupled chemokine receptors that belong to the GPCR family. Over 40 chemokines and 20
chemokine receptors were identified in humans, representing a complex system in which a chemokine can
bind several receptors and vice versa. The chemokine receptor CXCR3 has been associated with immune
inflammatory responses and diseases such as asthma, but could also be involved in cancer. CXCR3
expression is rapidly induced on T cel s following activation, and remains highly expressed on CD4(+) T cells,
CD8(+) T cells, as well as dendritic cells and innate-type lymphocytes natural killer cel s. CXCR3 is activated
by three IFN-γ-inducible ligands: CXCL9 (MIG), CXCL10 (IP-10) and CXCL11 (I-TAC). I-TAC is also a ligand of
the chemokine receptor CXCR7, which also shares the ligand SDF-1 with CXCR4. So far, no admitted drug
successful y targets CXCR3 despite several clinical trials: a better understanding of the mechanism by
which the receptor functions is thus required. Oligomerization of GPCRs is now a generally accepted
concept. For example, we know that CXCR7 heterodimerizes with CXCR4 (with which it shares the ligand
SDF-1) and downregulates CXCL12-mediated G protein signaling. Whether such a relation between CXCR7
and CXCR3 (which shares ITAC as a ligand) exists has not yet been tested. Here, using Bioluminscence
resonance energy tramsfert (BRET) methods (EPAC cAMP reporter, arrestin recruitment, and
heteromerization), we report that the different ligands of CXCR3 induce different responses. ITAC responses
are potent and efficacious. IP10 is relatively potent, but has poor efficacy, while MIG responses show very
little potency. Furthermore, we show that CXCR3 forms homodimers, and heterodimers with CXCR7.
Nonetheless, our results suggest that CXCR7 prefers homodimerization over heteromerization with CXCR3,
as suggested by lower BRET50 values in homodimers than in heteromers. This sheds doubts on the in vivo
relevance of CXCR3/CXCR7 heteromerization in cells expressing these receptors endogenously, and thus
potential regulation of CXCR3 via heteromerization with CXCR7.
P20 - GUSAN, Svetlana
Cyclic AMP attenuates the enhanced expression of Gi proteins and hyperproliferation of vascular smooth
muscle cells from SHR : Role of ROS and ROS-mediated signaling.
Svetlana Gusan, Madhu B. Anand-Srivastava, Université de Montréal, Dép. de physiologie, Faculté de
médecine, Pavil on Paul-G.-Desmarais, Montréal (Qc).

We have previously shown that angiotensin II-induced enhanced expression of inhibitory G proteins (Gi)
was attenuated by N6,2′-O-Dibutyryladenosine 3′,5′-cyclic monophosphate sodium salt (dbcAMP) in A10
vascular smooth muscle cells (VSMC). The enhanced expression of Gi protein and enhanced cel
proliferation in VSMC from spontaneously hypertensive rats (SHR) was shown to be attributed to the
enhanced levels of endogenous Ang II. The present study was therefore undertaken to examine the role of
cAMP in the enhanced expression of Gi proteins and increased proliferation of VSMC from SHR and to
further explore the underlying molecular mechanisms responsible for this response. VSMC from SHR showed
an enhanced expression of Giα-2 and Giα-3 as compared to VSMC from WKY which was decreased in a
dose-dependent manner by dbcAMP, a cel -permeable cAMP analog. In addition, the enhanced
functions of Gi proteins as demonstrated by enhanced inhibition of adenylyl cyclase by inhibitory hormones
and forskolin (FSK)-stimulated adenylyl cyclase activity by low concentration of GTPγS in VSMC from SHR
were also restored to the WKY levels by dbcAMP. The enhanced proliferation of VSMC exhibited by SHR
was also attenuated by dbcAMP and forskolin, an activator of adenylyl cyclase. In addition, dbcAMP also
restored the increased production of superoxide anion (O2-), NAD(P)H oxidase activity and enhanced
expression of NOX 4 and p47phox proteins observed in VSMC from SHR to control levels. Furthermore, the
increased phosphorylation of PDGF-R, EGF-R, c-Src and ERK1/2 exhibited by VSMC from SHR were also
decreased by dbcAMP in a dose-dependent manner. These results suggest that decreased levels of
intracellular cAMP exhibited by VSMC from SHR contributes to the enhanced expression of Gi proteins and
hyperproliferation through increasing oxidative stress and transactivation of EGF-R, PDGF-R and MAP kinase
signaling pathway and increasing the levels of intracel ular cAMP by dbcAMP attenuates the increased
expression of Gi proteins and hyperproliferation of VSMC through the inhibition of ROS and ROS-mediated
signaling pathways.
P21 - HABIB, Eric
Développement par fragments d'inhibiteurs de résistance aux antibiotiques.
Eric Habib, Karine Auclair, Anthony Mittermaier, McGill University, Dept. of Chemistry, 802 Sherbrooke St.
West, Montreal (Qc).

Les aminoglycosides sont parmi les antibiotiques les plus utilisés.Un effet de leur utilisation intense est
l'émergence rapide de résistance des bactéries face à cette classe d'antibiotiques. Le mécanisme
principal de résistance aux aminoglycosides observé en clinique est l'expression d'enzymes bactériens qui
transforment ces antibiotiques de façon covalente. Un de nos objectifs de recherche est de bloquer la
résistance en inhibant les aminoglycoside acétyltransferases (AAC). Les études par RMN ont démontré que
l'AAC(6')-Ii subit un important changement de conformation lors de l'association avec ses substrats. Nous
exploitons ce changement pour identifier rapidement des fragments qui s'associent à la protéine. Ce
réarrangement structural de l'AAC(6')-Ii permet l'utilisation des techniques de criblage par RMN observant
la protéine (ex; HSQC). Nous employons en parallel des méthodes de RMN basées sur les ligands
(waterLOGSY, STD et ILOE), ainsi que des essais de cinétique enzymatique pour mesurer l'affinité et
l'inhibition des fragments. L'information est ensuite utilisée dans le design de molécules en combinant les
fragments actifs. La liaison chimique de ceux-ci devrait produire des inhibiteurs plus puissants que les
différents fragments, tandis que la modification nous donnera plus d'information sur leur mode de liaison.
Les inhibiteurs de l'AAC(6')-Ii représentent des candidats importants dans le dévelo ppement de
médicaments pour contrer les infections resistantes.


P22 - HOUDA, Salmi

Evaluation d'inhibiteurs de protéases à sérine dans les actions neuronales de la céruloplasmine.
Houda Salmi, Philippe Ducharme, Joanne Paquin, UQAM, Faculté des sciences, Département de chimie,
Montréal (Qc).

La céruloplasmine (CP) est une protéine à cuivre dont l'activité ferroxydasique en fait un régulateur du
métabolisme du fer. La CP pourrait avoir d'autres rôles dans le cerveau. In vitro, elle induit l'agrégation de
neurones différenciés de cel ules souches P19 et stimule le clivage de la protéine reeline en son fragment
de 300K. Ces deux actions suggèrent un rôle potentiel de la CP dans le développement du cerveau. Nous
avons montré que le SBTI et l'aprotinine (Apro), des inhibiteurs extracellulaires de protéases à sérine,
inhibent les deux actions neuronales de la CP. Pour mieux comprendre les relations entre protéases et
actions de la CP, nous avons évalué des aspects cinétiques de l'effet du SBTI et de l'Apro, et testé l'action
d'inhibiteurs de protéases plus spécifiques. L'agrégation induite par la CP est installée à 8h de traitement.
Le clivage de la reeline se remarque à partir de 12h. Ajoutée au début du traitement, la combinaison
SBTI+Apro inhibe les deux actions de la CP. Ajoutée après 1h, la combinaison inhibe seulement le clivage
de la reeline. Des convertases et l'activateur tissulaire du plasminogène ont des rôles dans le
développement du cerveau mais des inhibiteurs de ces protéases n'ont pas affecté les actions neuronales
de la CP. Le SBTI et l'Apro restent pour le moment des outils uniques pour l'étude des protéases impliquées
dans les actions neuronales de la CP.
P23 - LeBLANC, André

Titre du résumé : Developing a new strategy for the identification of reactive metabolite protein targets
using click chemistry.
André LeBlanc, Tze Chieh Shiao, René Roy, Lekha Sleno, UQAM, Département de chimie, 2101, rue Jeanne-
Mance, Montréal (Qc).

When ingested, most drugs normal y generate more polar and thus less toxic metabolites that are easily
excreted by the body. However, certain compounds can be metabolically transformed into electrophilic
species, called reactive metabolites, which have often been linked to drug toxicity through their ability to
covalently and irreversibly bind to protein. Variations within the proteins targeted by different reactive
metabolites could explain the range of toxicological effects and there is presently a lack of information
regarding their identity. The popular click chemistry azide-alkyne Huisgen reaction has been applied to the
modification of protein and peptides. The reliability, specificity and biocompatibility of this reaction render
it a promising avenue for the purpose of purification from complex mixtures. We are currently developing a
new strategy for the identification of reactive metabolite protein targets using click chemis try combined
with affinity purification. Alkyne-containing analogs of drugs known to form reactive metabolites are utilized
as the handle for the click-based purification via reaction with azide-containing biotin analogs for affinity
purification on streptavidin beads. The selective purification and enrichment of the key modified peptides
following protein digestion will allow these peptides to be sequenced, the specific site of modification to
be pinpointed and the target proteins to be identified by state-of-the-art LC-MS/MS techniques.
P24 - LECLAIRE, Marie-Eve

Test amélioré de l'évaluation de la perméabilité intestinale aux médicaments.
Sarra Zaraa, Marie-Eve Leclaire et Grégoire Leclair, Université de Montréal, Faculté de pharmacie, Pavillon
Jean-Coutu, 2940, chemin de Polytechnique, Montréal (Qc).

La mauvaise absorption intestinale représente un problème majeur dans la découverte de médicaments.
En effet, une panoplie d'entités chimiques considérées comme prometteuses a été écartée malgré leur
grande biodisponibilité qui pourrait être améliorée. Le test PAMPA (Parallel Artificial Membrane
Permeability Assay) est un modèle simple et bien établi qui permet l'évaluation préliminaire de la
perméabilité d'un médicament, mais qui demeure toutefois significativement différent de la membrane
intestinale. Les objectifs de notre projet sont alors d'améliorer la technologie PAMPA en développant de
nouvel es membranes plus représentatives des parois intestinales humaines et d'en faire un dispositif prêt à
l'emploi facilement utilisable par tout laboratoire désirant réaliser ce type d'évaluation. Nous
développerons donc des membranes modèles renfermant un film polymère entre la bicouche lipidique qui
sera utilisable avec les cellules de Franz.
P25 - LÉTOURNEAU, Myriam

Allosteric modulation of the urotensinergic system: insight into UII and URP receptor activation.
M. Létourneau, Q.T. Nguyen, N.D. Doan, J. Dupuis, A. Fournier and D. Chatenet, INRS-Institut Armand-
Frappier, Laboratoire d'études moléculaires et pharmacologiques des peptides, 531, boul des Prairies,
Laval (Qc).

The urotensinergic system, mostly involved in the pathogenesis and progression of hypertension and
atherosclerosis, is composed of two ligands, namely, urotensin II (UII) and urotensin II-related peptide (URP)
and one specific membrane-bound UT receptor, belonging to the 1A subclass of GPCRs. The precise
delineation of the (patho)physiological role of the urotensinergic system in vivo has been hampered by the
absence of potent and selective UT antagonists. As such, drug discovery programs have continued to
focus on the identification of potent and selective UT antagonists suitable for assessment in various animal
species and man. With the recent discovery that UII and URP could exert common but also different
biological activity, it appeared crucial to reassess the mechanism of receptor activation as well as the
specific role of UII and URP in physiological and pathological conditions and to new develop UT
antagonists. Using a combin ation of ex vivo studies, i.e. rat and monkey aortic ring contraction, as wel as
dissociation kinetics studies using transfected CHO cel s expressing the human UT receptor, we
demonstrated for the first time the presence of specific pockets/interactions within UT, aimed at selecting a
specific UT conformation that can differentiate UII and URP biological activity. Our studies also revealed the
propensity of [Pep4]URP, i.e. urocontrin A (UCA), to decrease the maximal response of hUII without any
significant change in potency, without having any noticeable effect on the URP-induced vasoconstriction.
This probe dependent al osteric modulation of the urotensinergic system was confirmed by dissociation
experiments. Indeed, [Pep4]URP is able to increase the dissociation rate of hUII, but not URP. Finally, we also
demonstrated that the N-terminal domain of UII, probably involved in the differential binding patterns
associated with UT activation, acted as a specific modulator of URP-associated actions. Such compounds,
i.e. UCA and rUII(1-7), representing the first al osteric modulators of the urotensinergic system, should prove
to be useful as new pharmacological tools aimed at deciphering the specific role of UII and URP in vitro but
also in vivo.
P26 - MATHIEU, Claudia

Development of new DCIR intracellular inhibitors.
Claudia Mathieu, Christian St-Pierre, Petronela Ancuta, André Pichette, Jean Legault et Caroline Gilbert,
Université Laval, Université du Québec à Chicoutimi, Université de Montréal, Centre de recherche en
rhumatologie-immunologie, 2705, boulevard Laurier, Québec (Qc).
Actual therapies for HIV-1 adequately control viral replication. Unfortunately these therapies do not cure
the disease, are associated with adverse events, and remain at risk of drug resistance. Finding new targets
and developing new therapies is crucial in the fight against HIV-1. Dendritic cell immunoreceptor (DCIR), a
C-type lectin receptor expressed at high levels on dendritic cells (DCs), is a newly described factor for HIV-1
attachment to immune cells. DCs can bind the virus and migrate to the lymph nodes where the virus is
transferred to CD4+ T lymphocytes (CD4TL) through cis and trans infection. We have recently demonstrated
that DCIR plays a key role in the initial propagation of HIV-1, through productive infection of DCs and viral
transfer to CD4TL. In addition, we have shown that DCIR is expressed on CD4TL from HIV-1 patients as wel
as apoptotic CD4TL. We determined that phosphorylation of the immunoreceptor tyrosine-base d inhibitory
motif (ITIM), contained in the intracellular region of DCIR, is important for HIV-1 attachment and infection.
This region is a potential target to block HIV-1 entry through DCIR. Thus, in this study we generated new
intracellular peptide inhibitors for DCIR and characterized their potential ability to block HIV attachment
and replication. DCs isolated from human blood or Raji-CD4-DCIR cell lines were incubated with peptides
containing phosphorylated immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif (ITIM) combined with a cel -
penetrating substance before being pulsed with HIV-1. Cell attachment and replication of HIV-1 was
measured by HIV-p24 ELISA. Our results show that blocking DCIR signaling using a peptide containing a
specific ITIM motif inhibits HIV-1 attachment and subsequent infection. The data presented here
demonstrate that blocking the tyrosine and threonine phosphorylation of the DCIR ITIM motif efficiently
interfere with the DCIR function in HIV propagation. In conclusion, this study identifies a new class of
molecules capable of blocking HIV-1 transmission by DCs.
P27 - MEIER, Florian

Analysis of free carotenoids and carotenoid esters in algae species employing high resolution tandem
mass spectrometry.
Florian Meier, Fong Lam Chu, Julie-Anne Jauffrit, Louka Sirois, Laura Pirastru, Lekha Sleno, Université du
Québec à Montréal, Dép. de chimie, 2101, rue Jeanne-Mance, Montréal (Qc).

Carotenoids are prevalent yel ow, orange and red pigments in nature with a wide range of benefits for
human health due to antioxidant and provitamin A activities. Biosynthesis in algae has been reported to be
up-regulated by stress, including salt treatment. Oocystis sp. were cultured under high-salt conditions and a
liquid chromatography-electrospray-high resolution tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) method
was developed for identification and relative quantitation of algal carotenoids. Mass spectra were
acquired on a hybrid quadrupole-time of flight (QqTOF) instrument. Post-acquisition mass defect filtering
and isotope ratios were employed to specifically detect carotenoids. Furthermore, the method was shown
to be capable of identifying individual carotenoids based on high-resolution MS/MS fragmentation data
and chromatographic retention on a reverse-phase (C18) column. This was applied to tentatively identify
carotenoids show ing statistical y significant changes in concentration over time. Lutein and violaxanthin
carotenogenesis pathways were found to be down-regulated, meanwhile astaxanthin pathways were
triggered upon sodium acetate treatment. Information-dependent acquisition based on specific neutral
losses was used to characterize different carotenoid monoesters in the algae samples as wel . C16 and C18
esters of astaxanthin and a canthaxanthin isomer were characterized using this method.

P28 - MELKOUMOV, Alexandre

Nanosizing of Nystatin for an Improved Antifungal Efficacy.
Melkoumov A., Goupil M., Louhichi F., Raymond M., De Repentigny L., Leclair G., Université de Montréal,
Faculté de pharmacie, Pavillon Jean-Coutu, 2940, chemin de Polytechnique, Montréal (Qc).

Introduction : Oral candidasis is a yeast infection of the buccal mucous membranes. It is caused mainly by
C. albicans. The infection is a serious risk factor of morbidity and mortality in immunodeficient patients.
Nystatin is a molecule of choice for the treatment of oral candidiasis. This drug is formulated as suspension
and is almost insoluble in physiological fluids and is impermeable to the intestinal membrane.
Hypothèse(s) et objectif(s): The objective is to reduce the particle size of nystatin in order to obtain a
nanosuspension. We hypothesize that this wil increase its specific surface area, its surface of contact with
the infectious agent and possibly its diffusion within the infected tissue. Therefore, the nanosuspension wil
have superior antifungal efficacy compared to the regular suspension.
Méthodes: Regular suspension of nystatin is commercial y available (PMS-Nystatin). A nanosuspension of
nystatin of identical co mposition was prepared by mil ing the regular suspension using a high energy
DynoMil ML (GlenMills). Nystatin concentration was determined by HPLC (Shimadzu Prominence) and
particle size by laser diffraction (Coulter LS13320). In vitro activity against Candida albicans strains SC5314
(standard) and LAM-1 (clinical) was evaluated on a solid medium using a yeast growth inhibition method
(12.5 to 5000 µg/mL, 8 concentrations, n=9 for SC5314 and n=3 for LAM-1).
Résultats: A nystatin nanosuspension (x50 < 0.150 µm) was successful y prepared from a regular suspension
(x50 = 6.6 µm). HPLC results were similar for both formulations. In vitro activity was superior at 100 to 5000
µg/mL concentrations (as some lower concentrations showed non-detectable diameters).
Conclusion: A nystatin nanosuspension was successfully prepared from a regular suspension while
maintaining its composition and assay. This nanosuspension demonstrated improved activity in vitro.

P29 - MURAT Brigitte

Screening compounds for G Protein-coupling bias at the β2 adrenergic receptor.
MURAT Brigitte*, STALLAERT Wayne*, Van der WESTHUIZEN Emma* and BOUVIER Michel, Université de
Montréal, Institut de Recherche en Immunologie et Cancérologie (IRIC), Département de biochimie,
Montréal (Qc).

The β2 adrenergic receptor (β2-AR) is a G Protein-Coupled Receptor that engages multiple signal ing
pathways. Through its coupling to the Gs protein, it induces the activation of the adenylyl cyclase, leading
to cyclic AMP production. β2-AR also triggers the activation of the Gi protein, leading to the inhibition of the
adenylyl cyclase and the decrease of cyclic AMP, as well as the induction of the ERK1/2 pathway. The
design of drugs biased towards one pathway or another is of potential interest. Indeed, compounds that
selectively modulate the signalling underlying a given pathology would be of great therapeutic interest, as
this has been proposed for cardiovascular diseases. In this project, we have screened a small library of 44
uncharacterized β2-AR ligands using Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET)-based biosensors
to characterize Gs vs Gi coupling bias. The strategy used to study these signal ing pathways upon
stimulation of the β2-AR took advantage of recently characterized BRET-based biosensors developed in the
laboratory. To fol ow the Gi pathway, we used a recruitment assay where the Gi protein is fused to the
Renil a Luciferase II (RlucII) and the β2-AR is fused to a GFP10 fluorophore. For the Gs pathway, we followed
its activation, using the Gαs subunit fused to RlucII and the Gγ subunit fused to GFP10. In each case, control
experiments using isoproterenol (ISO) and ICI118551, the respective prototypical agonist and inverse
agonist, were carried out to determine the optimal experimental conditions for each biosensor (i.e.
activation of Gs and Gi pathway with ISO and inverse agonism on these pathways with ICI118551). Results
from the screen showed a wide range of G protein-coupling profiles across the compound library. Notably,
most of the compounds presented a bias towards the Gs protein when compared with the prototypical β2-
AR agonist ISO. Only a few compounds were found to exhibit a preference towards the Gi protein and
these were relatively weak biases. Interestingly, some compounds were observed to activate the Gs
protein while presenting an inverse activity towards the Gi protein. In conclusion, these BRET-based
biosensors are useful tools to characterize the pharmacological profile of large libraries of compounds. In
the particular case of the β2-AR, this screen has identified key compounds that wil permit further
exploration of the role of Gs/Gi coupling on downstream signal ing and cell physiological responses.
P30 - NAGI, Karim

RÉGULATION DU COMPLEXE CONSTITUTIF FORMÉ PAR LE CANAL POTASSIQUE KIR3 ET LE RÉCEPTEUR OPIOÏDE
DELTA PAR LA BARR2.
Karim Nagi (1,2); Terence Hébert (3) and Graciela Pineyro (1,2), (1) Ste-Justine Hospital Research Center, (2)
University of Montreal, Pharmacol. Dept. and (3) McGil University, Dept. Pharmacol. & Ther., Montreal (Qc).
Introduction : Les opiacés figurent parmi les analgésiques les plus efficaces pour le traitement des douleurs
sévères. Ces analgésiques ciblent spécifiquement les récepteurs opioïdes. Des études de notre laboratoire
ont révélé que le récepteur opioïde delta (ROD), la protéine G et certains effecteurs atteignent la
membrane comme une unité de signalisation. Face à ces observations, nous proposons que les protéines
régulatrices du ROD, comme la β-arrestine (βarr), soient recrutées aux complexes plutôt qu'aux récepteurs
isolés. Si cela est vrai, on estime que la désensibilisation du ROD est influencée par différents partenaires
d'interaction, tels que les effecteurs.
Méthodologie : Pour tester cette hypothèse, nous avons comparé la régulation des RODs exprimés seuls ou
associés à la protéine G et l'effecteur Kir3. Tout particulièrement, nous avons évalué, par la technique de
BRET, la capacité du récepteur isolé ou en complexe avec le canal à recruter la βarr. Cependant, les
conséquences fonctionnel es de chacun des recrutements sur l'internalisation et le recyclage du récepteur
ont été caractérisées par les techniques d'ELISA et d'immunocytochimie.
Résultats : Nos résultats montrent que le ROD, la protéine G et Kir3 de type neuronale restent associés suite
à une activation soutenue (30 min) avec l'agoniste SNC-80 (1µM). La βarr est recrutée vers l'extrémité C-
terminale de ROD et à proximité du dimère Gbetagamma et Kir3 ce qui cause l'internalisation de ROD et
Kir. Cette dernière observation a été visualisée dans les lignées immortalisées HEK ainsi qu'au niveau des
neurones corticaux. De plus, la présence de Kir3 au sein du complexe contenant ROD et la protéine G
modifie le recrutement de βarr vers le récepteur et augmente son internalisation et recyclage.
Conclusion : Prises ensemble, ces données indiquent que le ROD et le canal Kir3 de type neuronale sont
régulés en tant qu'un complexe et montrent que le récepteur est régulé d'une manière différentiel e qui
dépend de la composition du complexe signalétique dans lequel il est exprimé.

P31 - NAMA, Nassr

The peptidomimetic TC14012, an inverse agonist on CXCR4-ß-Arrestin2 pathway.
Nassr Nama, Stéphanie Gravel, Nicolas Montpas, Guil aume Sylvain-Drolet, Nikolaus Heveker, Université de
Montréal, Centre de recherche, Hôpital Sainte-Justine, 3175, Chemin de la Côte Sainte-Catherine,
Montréal (Qc).

Constitutively active GPCR mutants (CAMs) spontaneously activate G-protein signaling and are models of
agonist-induced GPCR activation. Constitutively inactive mutants (CIMs) that spontaneously recruit beta-
arrestin are devoid of G-protein signaling and are models of agonist-induced GPCR desensitization. Inverse
agonists have negative efficacy on CAM activity. Under the perspective of biased agonism, it is
conceivable that CAM inverse agonists (of G-protein signaling) do or do not act as inverse agonists (of
arrestin recruitment) on CIMs. CXCR4 a G-protein coupled receptor (GPCR) that binds the chemokine
ligand CXCL12 (SDF-1α). CXCR4 is involved in different pathologies including tumor metastasis, inflammatory
diseases, and HIV infection. It is the most widely expressed chemokine receptor on cancer cel s. After
activation, CXCR4 signals through two major pathways: Gα/i and β-arrestin. β-arrestins terminate G-protein
signaling and target the desensitized receptor to endocytosis. TC14012 is known as an inverse agonist of
CXCR4 on the canonical G-protein pathways, while AMD3100 is a neutral antagonist. Though the role of ß-
Arrestins in the CXCR4 signaling is well established, the effect of TC14012 or AMD3100 was not investigated
on this pathway so far. This is mainly due to the lack of a suitable model (CXCR4 CIM). We tested a set of
CXCR4 mutants on their spontaneous signaling capacity of Gα/i and ß-Arrestin2 pathways, using BRET2 as a
cAMP reporter (G-protein pathway) and to detect the recruitment of ß-Arrestin2 to the receptor. Besides
the already reported N119S CAM, we found that R134A was a CIM that was inactive on the Gα/i signaling,
but constitutively recruited arrestin. TC14012, but not AMD3100, was found to be an inverse agonist on the
ß-Arrestin2 pathway. Their effects on CIM R134A surface expression and erk kinase activation remain to be
determined.
P32 - NGUYEN, Thi Tuyet Mai

Les récepteurs intracellulaires de l'urotensine II: nouvelles cibles thérapeutiques?
T.T. M. Nguyen,1,2 M. Létourneau,1,2 Q.T. Nguyen,3 J. Dupuis,3,4 D. Chatenet,1,2 and A. Fournier1,2, 1.
Laboratoire d'études moléculaires et pharmacologiques des peptides, Université du Québec, INRS – Institut
Armand-Frappier, Laval (Qc), 2. Laboratoire International Associé Samuel de Champlain (INSERM – INRS –
Université de Rouen); 3. Montreal Heart Institute, Université de Montréal, Montréal (Qc); 4. Department of
Medicine, Université de Montréal, Montréal, (Qc), Laboratoire d'études moléculaires et pharmacologiques
des peptides, Université du Québec, INRS – Institut Armand-Frappier, 531, boul. des Prairies, Laval (Qc).

Le système urotensinergique est composé de deux peptides, i.e. l'urotensine II (U-II) et l'urotensin II-related
peptide (URP), qui sont les ligands endogènes d'un récepteur à 7 domaines transmembranaires dénommé
UT. De nombreuses évidences ont montré que le système urotensinergique est directement associé à la
pathogenèse et la progression de diverses pathologies cardio-vasculaires et rénales. Les récepteurs
couplés aux protéines G (RCPG), incluant UT, sont généralement localisées à la membrane plasmique des
cellules. Toutefois, diverses études ont démontré la présence de sites de liaison fonctionnels, notamment
pour l'endothéline et l'angiotensine, sur les noyaux des cellules. Dans cette étude, nous avons mis en
évidence la présence et la régionalisation tissulaire de récepteurs nucléaires de l'UII dans des extraits de
cœur, de cerveau, de moelle épinière chez le rat et le singe de mêm e que dans des lignées cellulaires
humaines. Ces récepteurs nucléaires se sont avérés capables, suite à leur activation, d'initier la
transcription. De plus, l'analyse de leur niveau d'expression dans un modèle in vitro d'ischémie cérébrale et
in vivo d'hypertension pulmonaire suggère une participation de ce système urotensinergique intracrine
dans des pathologies centrales et périphériques. Enfin, en utilisant des cardiomyocytes de rat traités avec
U-II et des puces à ADN, nous avons pu identifier plusieurs gènes modulés par ces récepteurs UT nucléaires
qui sont liés aux diabètes, aux maladies cardiovasculaires et à la prolifération cellulaire. Des études plus
approfondies sont nécessaires, afin de caractériser plus précisément le rôle physiologique des récepteurs
UT intracellulaires, ce qui pourrait aboutir au développement de nouveaux médicaments thérapeutiques
et ainsi conduire à un changement du traitement médical classique.

P33 - NIRASAY, Souryvanh

Nouvelles membranes lipidiques PAMPA pour prédire la perméabilité de médicaments.
S. Nirasay, A. Badia, G. Leclair, Y. Mouget, J.P. Claverie, I. Marcotte, Université du Québec A Montréal,
Faculté des sciences, Département de chimie, Montréal (Qc).

Le Parallel Artificial Membrane Permeability Assay (PAMPA) évalue les propriétés d'absorption intestinale
des médicaments administrés oralement. Ce test mesure la perméabilité des composés en suivant leur
diffusion passive à travers une membrane artificiel e. Un filtre poreux imprégné de lipides compose cette
membrane. Toutefois, des interactions entre lipides et filtre ainsi qu'une possible obstruction des pores du
filtre constituent les limitations de ce modèle. Par conséquent, la perméabilité mesurée peut s'avérer
anormalement lente et non représentative de cel e réel e. Notre travail porte sur le design de nouvelles
membranes PAMPA qui ressemblent davantage à la structure lipidique des parois de l'intestin, où les lipides
sont organisés en double couche. Plus spécifiquement, ce nouveau modèle sera formé d'un coussin
polymère sur filtre nanoporeux, qui supportera une bicouche phospholipidique. Le polymère limitera les
effets de friction entre lipides et filtre. La polydopamine semble être un candidat prometteur grâce à sa
capacité à former un film fin, continu et uniforme à la surface du filtre. Une bicouche lipidique supportée
par un film polymère constitue une nouvelle approche pour tester rapidement la perméation passive de
médicaments. En fournissant des données plus fiables, notre PAMPA devrait ainsi contribuer à concevoir
des médicaments avec une meilleure biodisponibilité et accélérer la découverte de nouvelles
pharmacothérapies.


P34- OUELLET, Charles

ÉVALUATION BIOLOGIQUE IN VITRO DE COMPOSÉS À DOUBLE ACTION POUR LE TRAITEMENT DES CANCERS DU
SEIN HORMONODÉPENDANTS.
Charles Ouellet, Étienne Ouel et, Donald Poirier, Université Laval, CRCHUQ, 2705, boulevard Laurier,
Québec (Qc).

OBJECTIF : Nous cherchons à développer une molécule à double action pouvant inhiber la stéroïde
sulfatase (STS) et ayant la capacité d'activer ou d'inhiber spécifiquement le récepteur des estrogènes
selon le tissu (effet SERM). Un composé ayant ces caractéristiques pourrait avoir un impact important sur le
traitement des cancers du sein sensibles aux estrogènes.
MÉTHODES : L'inhibition de la STS est évaluée sur des homogénats de cellules HEK-293 transfectées avec la
stéroïde sulfatase. Pour estimer l'effet SERM, les molécules ont été testées pour évaluer leur capacité à
bloquer la stimulation de cellules de cancer du sein sensibles aux estrogènes (MCF-7 et T-47D) et
également pour évaluer leur capacité à stimuler la prolifération d'ostéoblastes humains (Saos-2). De plus,
l'activité alkaline phosphatase, un marqueur de différentiation des ostéoblastes, et l'affinité pour le
récepteur des estrogènes humain de type alpha (REα) furent testés pour certains composés prometteurs.
RÉSULTATS : Parmi l'ensemble des 168 molécules de 1re génération préalablement obtenues par synthèse
chimique, l'inhibiteur de la STS 6-EO-14, qui contient un groupement sulfamate, et l'analogue phénolique 8-
EO-14, libéré après l'inhibition irréversible de la STS, ont montré les meil eurs résultats. Le 6-EO-14 a démontré
une bonne inhibition de la STS (IC50 de 300 nM) et le 8-EO-14 a légèrement stimulé la prolifération des
cellules Saos-2 (21%). Par contre, les deux molécules ont démontré être estrogéniques sur les cellules T-47D
et n'ont pas été en mesure de bloquer la stimulation induite par l'estradiol (i.e. effet antiestrogénique).
Parmi les 38 composés de 2e génération, 3 composés sulfamates et leurs 3 analogues phénoliques ont
montré de bons résultats. Les 3 sulfamates inhibent très bien la STS (IC50 de 4, 9 et 17 nM) et les 3
analogues phénoliques stimulent la prolifération des cellules Saos-2. Ils sont également non-estrogéniques
et antiestrogéniques sur les cellules T-47D.
CONCLUSION : Ces résultats montrent que notre 1re génération de composés à double action inhibe bien
la STS mais ne possède pas la capacité de moduler l'activité de REα selon le tissu. Les composés de 2e
génération inhibent encore mieux la STS et possèdent l'effet tissu spécifique désiré, soit une action
antagoniste dans le tissu mammaire et une action agoniste dans le tissu osseux. Un des composés de 2e
génération pourrait donc être utilisé pour des tests in vivo.


P35 - PAILLEUX, Floriane

Quantification of targeted neuropeptides involved in osteoarthritis pain by LC-MS/MS.
Catherine E. Ferland, Floriane Pail eux, Pascal Vachon, Francis Beaudry, Université de Montréal,
Département de biomédecine vétérinaire, Faculté de médecine vétérinaire, 3200, Sicotte, C.P. 5000, Saint-
Hyacinthe (Qc).

Pain is a predominant clinical symptom associated with osteoarthritis (OA) leading to the partial loss of joint
function. Peripheral and central pain mechanisms may depend on the progression of the pathology.
Fol owing peripheral tissue injury, pronociceptive mediators sensitize sensory fibers axons located
throughout the knee joint leading to central neurogenic changes in the dorsal horn of the spinal cord and
affecting the transmission and modulation of the afferent signal. The aim of this study was to characterize
the modulation of specific pain-related neuropeptides including substance P, CGRP and dynorphins in
association with the degeneration of the articular structures and determine their potential used as
biomarkers. This study used an MIA induced osteoarthritis rat model. Knee joints as well as spinal cords were
collected at different time post MIA injection. Rat spinal cords were col ected and stored until analyzes. The
mass spectrometer operated in ful scan MS/MS and MRM mode. Precision and accuracy of the analytical
assay was assessed. The MIA model resulted in a time-dependent increase of structural damages including
a loss of cartilage proteoglycans and chondrocytes. Variations in the modulation of specific neuropeptide
concentrations were observed over time with the evolution of the knee pathology. Up-regulations of CGRP
and substance P were observed starting on days 7 and 28 respectively, whereas big dynorphin (1-32)
content decreased significantly on day 14 in comparison to control animals (p 0.05), and returned near
normal concentrations by day 28. The findings on spinal mechanism along with the histopathological
evaluation suggest that preclinical drug evaluations using the MIA model should be conducted between 7
and 21 days post injection. This study reveals a significant association between targeted neuropeptide
modulation, histological and behavioral results.
P36 - POGNON, Gregory

Développement d'un nouveau type de biosenseurs dédiés à l'identification de bactéries basés sur le
greffage électrochimique de viologène glycosylé.
Gregory Pognon, Tze Chieh Shiao and René Roy, Université du Québec à Montréal, Pharmaqam,
Département de chimie, Montréal (Qc).

Le projet vise le développement d'un biosenseur. Il cible en particulier la retranscription efficace de
l'interaction de lectines bactériennes avec les sucres qui leurs correspondent au mieux, via une modulation
des propriétés électrochimiques de notre système. Une affinité spécifique pour les bactéries E. Coli
uropathogénique est en particulier recherchée. Nos travaux de recherche concernent la préparation de
nouvel es macromolécules ayant une architecture organisée de manière à présenter à la fois des motifs
reconnaissables par les virus et les bactéries, une partie électrochimiquement active dont le signal sera
influencé par l'interaction avec la bactérie, et un site d'ancrage à une surface d'électrode pour pouvoir
suivre par électrochimie l'évolution du signal suite à l'interaction. Des molécules présentant des propriétés
rédox (calixarènes, quinones, viologènes…) sont synthétisées et substituées de manière adéquate par des
glycodendrimères, des dendrons ou tout simplement des sucres pour l'adhésions des bactéries, ainsi que
par des fonctions permettant un greffage solide à une surface d'électrode (une amine aromatique par
ex). Le greffage de ces architectures moléculaires sur électrodes se fait en deux étapes successives
(chimique puis électrochimique). Cette modification contrôlée des électrodes engendre des signaux
modulables et ainsi une signature physico-chimique bien définie. Des études évaluant les altérations des
réponses électrochimiques, suite à l'adhésion des bactéries sur le système ainsi créé sont alors menées.


P37 - QUOYER, Julie

Biased allosteric regulation of the chemokine receptor CXCR4 by Pepducins.
Quoyer J(1), Armando S(1), Janz J(2), Carlson K(2) and Bouvier M(1), (1) Institute for Research in
Immunology and Cancer (IRIC), Department of Biochemistry, Université de Montréal, Canada, and (2)
Anchor Therapeutics, Cambridge, MA, USA.

Development of new pharmacological tools modulating G protein-coupled receptors (GPCRs) is critical to
gain knowledge of their signal ing properties. A novel class of GPCR allosteric modulators has been
developed, which targets the cytoplasmic face of the receptors. This class of molecules, called pepducins,
consists of a peptide derived from the intracel ular loop region of a target GPCR linked to a lipid tether. Our
project aims at dissecting the molecular mechanisms underlying the effects of pepducins. Using the
chemokine C-X-C-motif receptor 4 (CXCR4) as a model system, we studied the ability of two pepducins,
ATI-2341 and ATI-2346, to modulate Gα-dependent and -independent signalling pathways with BRET-based
biosensors. Our results demonstrated that ATI-2341, similar to the natural agonist stromal cel -derived factor
1-α (SDF-1α), promotes the engagement of Gi by CXCR4 as indicated by a pepducin-induced increase in
BRET betwe en the receptor and Gαi. This engagement resulted in the activation of Gi as monitored by a
ligand-promoted decrease in BRET between Gαi and Gγ. Whereas ATI-2341 acted as a full agonist
comparable to SDF-1α on the Gi-activated pathway, ATI-2346 acted as a partial agonist leading to a
partial engagement of Gαi. Interestingly, in contrast to SDF-1α, neither of the pepducins promoted β-arrestin
1 and 2 recruitment to the receptor. Furthermore, we demonstrated that a variant of CXCR4 whose GPCR
Kinase (GRK) 2/3 phosphorylation sites are substituted by alanine, lost its ability to recruit β-arrestin upon SDF-
1α stimulation. Neither of the two pepducins were able to recruit GRK2 to the receptor. These results suggest
that ATI-2341 and ATI-2346 function as biased ligands for CXCR4 favoring Gi- over GRK2/3 and β-arrestin-
mediated signalling. These findings demonstrate that development of pepducins represents a novel
approach for the design of allosteric, peptide-based modulators that al ow selective engagement of
signalling pathways. This new class of GPCR modulators may offer greater functional selectivity and an
improved therapeutic profile.
P38 - RICARD, Simon
Synthèse chimique d'un produit naturel de la famille des pyrrolizidines à l'aide de la chimie du cuivre.
Simon Ricard, Benoit Daoust, Université du Québec à Trois-Rivières, Pavillon Pierre-Boucher, local 1030, Trois-
Rivières (Qc).

Les réactions de couplages sont des réactions dans lesquelles deux molécules sont liées à l'aide d'un
catalyseur métallique. Il y a plusieurs catalyseurs utilisés dans la littérature comme le pal adium, le
ruthénium et l'iridium. Dans le laboratoire du professeur Benoit Daoust, c'est la chimie du cuivre qui est
étudiée et développée. Les précédents travaux ont mené à la réalisation de plusieurs réactions issues de
couplages au cuivre. Ces travaux ont aussi mené à l'élaboration d'un outil de synthèse constitué de trois
réactions successives : un couplage au cuivre impliquant un réactif azoté, un couplage au cuivre
impliquant un réactif oxygéné et un réarrangement de Claisen. Cet outil de synthèse a déjà été utilisé
dans le laboratoire du professeur Benoit Daoust pour la synthèse de précurseurs d'acides aminés. Dans le
présent projet, ce même outil de synthèse sera utilisé pour la synthèse d'un produit naturel de la famille
des pyrrolizidines, soit l'alcaloïde 223H'. Le projet se divisera donc en trois grandes parties : 1) la synthèse
d'un composé sur lequel il est possible d'utiliser l'outil de synthèse; 2) utilisation de l'outil de synthèse; 3)
modification du composé obtenu à l'aide de l'outil de synthèse avec diverses réactions pour obtenir
l'alcaloïde 223H'. Les pyrrolizidines sont des alcaloïdes produits naturellement par les plantes et certains
animaux comme défense contre les prédateurs. Ce sont des composés bicycliques dont le squelette est
formé de deux cycles à cinq membres ayant un lien C−N commun. Les pyrrolizidines sont classées selon la
position et la nature des substituants sur le squelette. Dans un premier temps, les réactions seront effectuées
de façon racémique pour évaluer la faisabilité de la synthèse et optimiser certains points au besoin. Dans
un second temps, l'alcaloïde 223H' sera synthétisé de façon énantiopure en utilisant un alcool al ylique
chiral lors du deuxième couplage au cuivre.


P39 - ROULEAU-MAILLOUX, Étienne

Mesure de l'impact de l'activité physique sur l'anticoagulothérapie à la warfarine.
Étienne Rouleau-Mailloux, BSc., Yassamin Feroz Zada, MSc. et Marie-Pierre Dubé, PhD, Université de
Montréal, Institut de Cardiologie de Montréal, 5000, rue Bélanger E., Montréal (Qc).

La warfarine est l'anticoagulant le plus utilisé au monde. Il possède un index thérapeutique très étroit et
une dose trop faible ou trop élevée peut mener à la mort. La dose adéquate varie énormément entre les
individus et les facteurs qui expliquent cette variance ne sont pas tous connus. Des indices dans la
littérature scientifique indiquent que l'exercice physique a un impact significatif sur la thérapie (Shibata,
1998), mais peu d'études ont expliqué ce phénomène. Une meilleure compréhension des interactions
entre la warfarine et l'environnement permettrait de limiter les chances du patient d'être à l'extérieur de sa
cible et ainsi diminuer ses risques. Dans le cadre d'une étude observationnelle multicentrique sur la
warfarine à l'Institut de cardiologie de Montréal, nous récoltons des informations très vastes sur le mode de
vie et sur l'état de santé de 2500 patients nouvellement traités à la warfarine. Les résultats préliminaires,
portant sur les 254 premiers participants, ont reproduit les observations de Shibata, soit que les patients
actifs ont une réponse plus faible au traitement. La première analyse a démontré que les patients actifs
avaient une réponse plus faible que les patients inactifs, pour une dose semblable de warfarine (valeur-p =
0,0083). Cette association est ajustée pour la dose de warfarine, la cible du traitement et le poids du
patient. Deux autres mesures ont aussi indiqué une possible interaction de l'activité physique avec
l'antigoaculothérapie à la warfarine : la dose au 3e mois d'étude était plus forte pour les patients actifs
(valeur-p = 0,002) et la dose de sta bilisation pour les patients stabilisés était aussi plus élevée pour les
patients les plus actifs (valeur-p = 0,062). Ces analyses sont ajustées pour de très nombreux facteurs
confondants, dont l'âge, le sexe, la comédication, l'alimentation et autres habitudes de vie. La variable
d'activité physique était dichotomique; soit que le patient était catégorisé actif ou inactif. Deux
hypothèses sont avancées pour expliquer cette variation. Une modification dans la distribution de la
warfarine, qui est fortement liée aux protéines plasmatiques, pourrait limiter la concentration de warfarine
active et une induction des enzymes de métabolisation par l'exercice pourrait expliquer une meilleure
inactivation de la molécule par le foie.

P40 - TALBOT, Amélie

Réalisation et optimisation des conditions réactionnelles menant à l'ancrage et au relargage des
composés hydroxyacétyléniques sur support solide pour la synthèse de composés biologiquement actifs et
métaboliquement stables.
Talbot, Amélie; Maltais, René; Poirier, Donald, Lab. de chimie médicinale – Centre de recherche du
CHUQ/CHUL (Axe Endocrinologie et Génomique) et Université Laval – Faculté de médecine (Dép. de
médecine moléculaire), 2705, boul. Laurier, Québec (Qc).

OBJECTIF : Les stéroïdes qui possèdent un alcool tertiaire acétylénique en position 17 sont bien connus pour
être des composés biologiquement plus stables que leur alcool secondaire correspondant. De plus,
certains aminostéroïdes de ce type ont prouvé leurs efficacités in vitro comme agents cytotoxiques sur
plusieurs lignées cel ulaires cancéreuses. L'ancrage d'un composé hydroxyacétylénique sur un support
solide et l'introduction subséquente de diversités moléculaires nous est apparu un moyen intéressant pour
générer des chimiothèques de ces composés éthinylés ayant potentiellement de meil eures propriétés
biologiques.
MÉTHODES : Dans le but d'optimiser les conditions réactionnel es pour ancrer et relarguer des composés
stéroïdiens éthinylés sur une résine polystyrène diéthylsilane chlorée, un stéroïde modèle préalablement
activé par la formation d'un organolithien a été utilisé. Différentes concentrations de stéroïde, temps de
réaction et conditions de clivages furent testés. Par la suite, un stéroïde permettant l'introduction de
diversités moléculaires a été utilisé afin d'investiguer la compatibilité du nouvel ancrage avec une
séquence réactionnelle modèle.
RÉSULTATS : En utilisant la stratégie développée pour les deux composés modèles, une chimiothèque de 21
aminostéroïdes a été préparée par une nouvel e approche de chimie sur support solide. Les spectres RMN
1H de tous les membres de la chimiothèque ainsi que leurs spectres de masse confirment les structures
appropriées. De plus, la pureté, déterminée par HPLC, varie de 80 à 97 % pour les différents composés
obtenus pour les tests biologiques. À titre d'exemple, la biodisponibilité du composé A1 chez le rat (AUC0-
12h = 1338 ng•h/ mL) est supérieure à cel e du composé non éthinylé correspondant (AUC0-12h = 429
ng•h/ mL).
CONCLUSION : Le nouvel ancrage diéthylsilyl acétylénique est donc un outil très intéressant permettant la
synthèse sur support solide de nouvel es chimiothèques de composés hydroxyacétyléniques ayant une
meilleure biodisponibilité.
P41 - THIBEAULT, Marie-Pier

Synthèse sur support solide de dérivés hétorocycliques peptidomimétiques par réaction multicomposante
via une approche bifonctionnelle.
Marie-Pier Thibeault, Éric Biron, Université Laval, Centre de recherche du CHUQ (CHUL), Laboratoire de
chimie médicale, 2705, boulevard Laurier, Québec (Qc).

Les structures hétérocycliques pipérazines et azépines se retrouvent chez une grande variété de classes de
médicaments. Avec leur capacité à mimer des structures secondaires de protéines, ces hétérocycles
représentent des prototypes moléculaires de choix pour le développement d'inhibiteurs d'interactions
protéine-protéine (IPP) d'intérêts thérapeutiques. Comme les IPP jouent un rôle important dans un grand
nombre de processus biologique, elles représentent des cibles stratégiques pour le développement
d'agents thérapeutiques innovateurs. L'objectif du projet consiste à développer une nouvelle méthode de
synthèse rapide et efficace pour des hétérocycles peptidomimétiques pipérazinones et azépinones. La
stratégie de synthèse est d'utiliser une réaction multicomposante de type Ugi sur support solide via une
approche bifonctionnel e. Cette méthode permet de générer rapidement en une seule étape des
molécules peptidomimétiques hétérocycliques à 6 et 7 membres et de générer des chimiothèques à
haute diversité moléculaire. De cette manière, la diversité conformationnelle, en plus de la diversité
fonctionnelle, peut être explorée, augmentant significativement la diversité moléculaire et la chance de
trouver un inhibiteur sélectif. Les résultats obtenus démontrent que le support solide isonitrile peut être
produit rapidement et en grande quantité. Les précurseurs bifonctionnels sont aussi synthétisés
efficacement et permettent d'ajouter facilement une grande variété de groupements fonctionnels. De
plus, nous avons démontré que la réaction de Ugi sur support solide avec des précurseurs bifonctionnels
céto-acide permet de générer des hétérocycles de différents tail es avec une grande pureté et de bons
rendements.

P42 - TOULOUSE, Jacynthe

Fragment-based design of symmetrical bis-benzimidazoles as selective inhibitors of the trimethoprim-
resistant, Type II R67 dihydrofolate reductase.
Dominic Bastien(1), Maximilian C. C. J. C. Ebert(1), Delphine Forge(2), Jacynthe Toulouse(1), Natalia
Kadnikova(3), Florent Perron(2), Annie Mayence(4), Tien L. Huang(4), Jean Jacques Vanden Eynde(2),
Joelle N. Pelletier(1,3), (1) Dép. de biochimie, U. de Montréal, (2) Lab. de chimie organique, Université de
Mons, (3) Dép. de chimie, U. de Montréal, and (4) Division of Basic Pharmaceutical Sciences, Xavier
University of Louisiana, USA.

The continuously increasing use of trimethoprim as a common antibiotic for medical use and for
prophylactic application in terrestrial and aquatic animal farming has increased its prevalence in the
environment. This has been accompanied by increased drug resistance, generally in the form of alterations
in the drug target, dihydrofolate reductase (DHFR). The most highly resistant variants of DHFR are known as
Type II DHFR, among which R67 DHFR is the most broadly studied variant. We report the first attempt at
designing specific inhibitors to this emerging drug target by fragment based design. Detection of inhibition
in R67 DHFR was accompanied by parallel monitoring of the human DHFR, as an assessment of compound
selectivity. By those means, smal aromatic molecules of 150 to 250 g/mole (fragments) inhibiting R67 DHFR
selectively in the low millimolar range were identified. More complex, symmetrical bisbenzimidazoles and a
bis-carboxyphenyl were then assayed as fragment-based leads, which procured selective inhibition of the
target in the low micromolar range (Ki = 2 – 4 µM). The putative mode of inhibition is discussed according to
molecular model ing supported by in vitro tests.


P43 - TROTTIER, Alexandre

Intérêt d'un inhibiteur irréversible de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase type 1 pour le traitement de
maladies sensibles aux estrogènes.
Alexandre Trottier, Jenny Roy, René Maltais et Donald Poirier, Université Laval, CHUQ-CHUL, Québec (Qc).

Introduction: La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase type 1 (17β-HSD1) est l'enzyme qui catalyse la
transformation de l'estrone et de la déhydroépiandrostérone (E1 et DHEA) en estrogènes
physiologiquement actifs, soit l'estradiol et le 5-androstène-3β,17β-diol (E2 et 5-diol) respectivement. Une
inhibition sélective de cette enzyme est une approche intéressante pour traiter le cancer du sein ou
l'endométriose. Le PBRM, développé dans notre laboratoire, a déjà démontré une inhibition intéressante
de la 17β-HSD1 sans présenter d'effet estrogénique en cel ules intactes et chez la souris.
Objectif: Notre but était de déterminer l'intérêt thérapeutique du PBRM en déterminant son mode d'action
et sa sélectivité pour l'inhibition de la 17β-HSD1 en comparaison avec la 17β-HSD2, la 17β-HSD7, la 17β-
HSD12 et le CYP3A4.
Expérimentation: Des essais de conversion de [C14]-E1 en [C14]-E2 par la 17β-HSD1 purifiée ont été
effectués à différentes concentrations et temps de préincubation du PBRM et de l'enzyme en présence ou
non de E1 froid. Ces essais ont démontré que le PBRM inhibait de manière irréversible et compétitive la 17β-
HSD1. Cela a permis d'effectuer des essais de renouvel ement de l'enzyme (resynthèse) dans des cel ules
JEG-3 et T47D qui étaient traitées 24 heures à 1 µM de PBRM. Les cellules étaient ensuite lavées, puis la
conversion de [C14]-E1 mesurée à différents temps. L'activité de la 17β-HSD1 était récupérée à 50% en 2 et
3 jours respectivement pour les cel ules JEG-3 et les T47D. L'inhibition des 17β-HSD type 2, 7 et 12 exprimées
dans des cellules HEK293 intactes a également été testée via la mesure de la conversion de [C14]-E1 ou de
[C14]-E2. L'inhibition du CYP450 3A4 a été évaluée en utilisant la trousse « P450 Inhibition Kit CYP3A4/DBF»
achetée chez BD Supersomes. Aucune inhibition n'a été observée aux concentrations testées pour les 17β-
HSD types 2 et 7, tandis que la 17β-HSD type 12 était inhibée faiblement par le PBRM (26% à 10 µM). L'IC50
mesuré pour le CYP3A4 est de 4,1 µM ce qui représente un risque d'interaction faible avec cette enzyme
métabolique importante. Conclusion: Le PBRM est donc un inhibiteur efficace, irréversible et spécifique de
la 17β-HSD1. Le faible taux de synthèse de l'enzyme in vitro et la longue demi-vie du PBRM in vivo
suggèrent la possibilité de traitements peu fréquents à faibles doses. Ce type d'inhibiteur serait donc être
une nouvel e avenue thérapeutique avantageuse pour le cancer du sein et l'endométriose.
P44 - VÉZINA-DAWOD, Simon

Développement d'un ligand peptidomimétique pour la purification du facteur VIII par chromatographie
d'immunoaffinité.
Simon Vézina-Dawod, Xinxia Liang, Mathieu Drouin, Éric Petitclair et Éric Biron, Université Laval, Centre de
recherche du CHUQ (CHUL), 2705, boul, Laurier, Québec (Qc).

Le facteur anti-hémophilique A ou facteur VIII (FVIII) est une protéine plasmatique jouant un rôle central
dans la cascade de la coagulation comme cofacteur du facteur IX activé menant à l'activation du
facteur X (prothrombinase). Une altération génétique ou l'absence du FVIII mène à l'hémophilie A.
Touchant un homme sur 5000, cette maladie est traitée par infusion de FVIII. Obtenu difficilement par
chromatographie d'immunoaffinité ou par techniques recombinantes, les coûts annuels associés à la
thérapie avec le FVIII sont estimés à environ 100 000$ par patient. Étant donné les risques, les difficultés et
les coûts associés aux méthodes de production actuelles du FVIII, il y a un besoin urgent de développer de
nouvel es méthodes d'isolation et de purification pour ce facteur de coagulation. Des études récentes ont
démontré qu'un peptide (EYHSWEYC) obtenu par criblage d'une chimiothèque combinatoire de peptides
était capable d'isoler le FVIII, une protéine de 330kDa, à partir de plasma sanguin par chromatographie
d'affinité. Malheureusement ce peptide est rapidement dégradé par les protéases. Pour contourner ce
problème, une approche par peptidomimétisme combinée à des études de structure-activité a été utilisée
pour augmenter la stabilité protéolytique du produit. Des analogues N-méthylés et peptoïdes ont été
synthétisés et leur capacité à lier le FVIII a été évalué. Les résultats obtenus démontrent que les analogues
tronqués WEYK sont capables de lier le FVIII. La stabilité protéolytique des analogues tronqués actifs a
également été évaluée et les résultats obtenus démontrent que les analogues N-méthylés et peptoïdes
résistent aux protéases.
P45 - WAGNER, Michel

Isotope-labeled differential profiling of amine-containing metabolites in cultured cells by high resolution
mass spectrometry.
Michel Wagner, Leanne Ohlund; Véronique Plante; Amélie Vézina; Tze Chieh Shiao; René Roy; Borhane
Annabi; Lekha Sleno, Lab. de spectrométrie de masse bioanalytique, Dép. de chimie, UQAM, Montréal
(Qc).
INTRODUCTION A differential labeling strategy with mass spectrometry (MS) analysis has been developed
for the relative quantitation of amine-containing metabolites in biological samples. The rationale relies on
the use of two versions of an isotopically-tagged reagent (a heavy and a light one, differing by 6 mass
units) to derivatize two samples (e.g. treated and control sample), which are further pooled and analyzed.
The six-mass unit difference between the two reagents al ows distinguishing between the derivatized
metabolites originating from each type of sample, whereas the calculation of their signal ratios al ows then
to characterize changes in metabolite levels from one sample to another (relative quantitation). This
approach has been applied to cultured cells as a model for monitoring oxidative stress (control vs. H2O2-
treated).
METHODS Aliquots of 106 human promyelocytic cells (HL60) were grouped in pairs of H2O2-treated and
untreated samples. Samples were extracted with methanol and further derivatized with benzyl-N-
oxysuccinimide at pH 8.5 for the labeling of amine groups. Each sample of the pair was derivatized with a
distinct form (light or heavy) of the reagent. Both samples were pooled and analyzed by reverse phase
liquid chromatography coupled with a hybrid quadrupole-time of flight MS instrument. (QqTOF, AB Sciex
TripleTOF 5600) operated in positive ion electrospray mode. RESULTS Preliminary experiments for method
development were based on a standard mixture of thirty nine amine metabolites. The labeling reaction
provides more hydrophobicity for analytes, and, overall, was found to enhance retention, separation and
MS signals. Moreover, a satisfactory correlation was observed between the amount ratios of light and
heavy-labeled metabolites present in samples and their corresponding LC-MS peak area ratios. In cel
extracts, metabolites of interest can be filtered based on the specific isotope pattern of pairs (6-mass unit
difference). Thanks to fast data acquisition capabilities of the QqTOF, col ection of MS/MS spectra can be
triggered automatically while stil conserving excellent chromatographic peaks for quantitation. The
identification of unknown metabolites is also possible from accurate mass measurements. This strategy
al owed the detection of several metabolites changing significantly between treated and untreated
samples, and, thus, associated with oxidative stress.
P46 - ZARAA, Sarra

Test amélioré de l'évaluation de la perméabilité intestinale aux médicaments.
Sarra Zaraa, Marie-Eve Leclaire et Grégoire Leclair, Université de Montréal, Faculté de pharmacie, Pavillon
Jean-Coutu, 2940, chemin de Polytechnique, Montréal (Qc).

La mauvaise absorption intestinale représente un problème majeur dans la découverte de médicaments.
En effet, une panoplie d'entités chimiques considérées comme prometteuses a été écartée malgré leur
grande biodisponibilité qui pourrait être améliorée. Le test PAMPA (Parallel Artificial Membrane
Permeability Assay) est un modèle simple et bien établi qui permet l'évaluation préliminaire de la
perméabilité d'un médicament, mais qui demeure toutefois significativement différent de la membrane
intestinale. Les objectifs de notre projet sont alors d'améliorer la technologie PAMPA en développant de
nouvel es membranes plus représentatives des parois intestinales humaines et d'en faire un dispositif prêt à
l'emploi facilement utilisable par tout laboratoire désirant réaliser ce type d'évaluation. Nous
développerons donc des membranes modèles renfermant un film polymère entre la bicouche lipidique qui
sera utilisable avec les cellules de Franz.

Source: https://pharmaqam.uqam.ca/upload/files/programmeaffiches.pdf